熒光定量pcr儀雜交應(yīng)用相輔相成
發(fā)布時間：2014-04-01 閱讀：1396次
熒光定量pcr儀整個定義過程:光彈燈發(fā)出徽發(fā)光。通過戰(zhàn)鏡等光學(xué)組塊到達(dá)96孔板上。樣品中發(fā)射的熒光按服原路返回，在雙色鏡處，由于波長與人射光不同，因此可以透過該談到達(dá)濾鏡輪，診鏡是可以旋轉(zhuǎn)選擇不同戰(zhàn)鏡的一個部件，它可以使特定波長的光通過，從而達(dá)到區(qū)分產(chǎn)物的目的。通過逮鏡輪的熒光屏經(jīng)過多元鏡后被儀器自帶的CCD相機(jī)所摘捉到，從而產(chǎn)生一個熒光信號。
主要用途：
1.定量檢測：定旦:落因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)墓因食品檢側(cè)、病原體檢測。
2.相對定ri基因在不同組織中的表達(dá)差異、藥物療效考核。
3.點突變檢測：檢側(cè)與疾腳相關(guān)的等位爺因點突變。用于檢側(cè)羲因突變和墓因組的不往定性。
特別提示:本制品中使用的TakaRa Ex Tag'" HS是利用抗Taq杭體的Hot Start的DNA辛合欣，與其他公司的化學(xué)修飾皿Hot Start用DNA歡合曲相比，如果高硯處理時間過長.會使醉的活性下降，其PCR的擴(kuò)增效率、定址度都會受到影響，如果在PCf反應(yīng)前進(jìn)行模板的班變性。
4.實臉結(jié)果分析
反應(yīng)結(jié)束后確認(rèn)Real Time PCR的擴(kuò)姍曲線和融解曲線，進(jìn)行PCR定I時制作標(biāo)準(zhǔn)曲線等。
建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序，如果該程序得不到良好的實臉結(jié)果時，再進(jìn)行PCR條件的優(yōu)化。由于使用值較低的引物等原因，兩步法PCR反應(yīng)擴(kuò)幼性能較差時，可以嘗試進(jìn)斤三步法PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
