梯度PCR儀設(shè)置梯度問題
發(fā)布時(shí)間：2013-12-03 閱讀：414次
梯度PCR在變性、延伸均可設(shè)置梯度，那么如果在摸條件時(shí)三步均設(shè)置梯度？
1.梯度PCR儀只是方便你尋找佳PCR退火溫度，可能減少你做PCR的次數(shù)和時(shí)間。使用時(shí)和樓上的兄弟說的一樣，但有一點(diǎn)需要說明一下，就是你所設(shè)的溫度梯度并不能象樓上的兄弟所說的那么簡單，設(shè)溫度梯度時(shí)，行的溫度是需要一個(gè)簡單計(jì)算的。
舉例說明：比如一個(gè)12X8的96孔板，如果一共可設(shè)12個(gè)溫度梯度，也就是說每8個(gè)孔是一個(gè)溫度。你所設(shè)的初始溫度是56度，你設(shè)的溫度梯度是14，那你每一排的溫度相差就是14/12。以些類推。
2.一個(gè)很實(shí)用且簡單的方法就是你將你所設(shè)計(jì)的引物我PCR產(chǎn)物放到Oligo中去評(píng)價(jià)，它會(huì)給你一個(gè)佳的退火溫度和循環(huán)參數(shù)，這個(gè)溫度實(shí)際上就和你通過梯度PCR摸索出來的退火溫度幾乎是一樣的。
3.以我的經(jīng)驗(yàn)就直接用軟件給出的退火溫度就沒有問題。
