萊普特科：熒光定量pcr儀常見問題解答
發(fā)布時間：2017-06-27 閱讀：1090次
熒光定量pcr儀由熒光定量系統(tǒng)和計算機(jī)組成，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設(shè)備相連的計算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正常化處理來彌補(bǔ)背景熒光的差異。正?；罂梢栽O(shè)定域值水平，這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。常見問題解答如下：
Q：7500定量PCR儀可以使用0.2ml PCR反應(yīng)管或者96孔板嗎？
A：不可以，7500快速定量PCR儀只支持0.1ml PCR反應(yīng)管或者96孔板。
Q：熒光定量pcr儀有什么特點？
A：（1）系統(tǒng)可以提供高通量，如384孔板和低密度芯片升級，以及自動手臂來裝載反應(yīng)板設(shè)備；
（2）是一個激發(fā)光和四色濾光片
（3）系統(tǒng)是用氬離子激光作為激發(fā)光源，可以掃描500nm -650nm所有波長的熒光
（4）快速系統(tǒng)是用鹵鎢燈作為激發(fā)光源，并利用濾光片檢測激發(fā)熒光
（5快速有五個激發(fā)光和五個濾光片，所以可以檢測遠(yuǎn)紅外。
Q：內(nèi)參基因與目標(biāo)基因是否需要在相同的反應(yīng)板上運行相對定量？
A：是，內(nèi)參基因必須和目標(biāo)基因在相同的反應(yīng)板上。軟件可以根據(jù)在相同反應(yīng)板上的內(nèi)參基因和目標(biāo)基因自動進(jìn)行相對定量計算，并計算估值區(qū)間。
Q：BHQ作為探針的淬滅基團(tuán)，在ABI定量PCR系統(tǒng)如何設(shè)定？
A：淬滅基團(tuán)設(shè)為none。
Q：7HT定量PCR系統(tǒng)軟件生成的文件有哪些？
A：針對7300 v1.4及以下版本軟件，7500 v1.4 及以下版本軟件，7900HT軟件生成的文件，包含擴(kuò)增曲線的為數(shù)據(jù)文件，以 sds為文件后綴。相對定量分析產(chǎn)生以sdm為后綴文件，設(shè)置模板以 sdt為后綴。
Q：用戶是否可以添加自定義染料？
A：可以，可以添加自定義染料，但染料的激發(fā)和發(fā)射波長必須與儀器的濾光片設(shè)置兼容。
Q：如何監(jiān)控反應(yīng)體系是否有蒸發(fā)？
A：查看Rox信號是否在整個PCR過程中保持一致。在多組分圖譜界面，選擇單孔，如果Rox信號逐漸增高，代表樣品孔中有蒸發(fā)。
Q：作用原理是怎么樣的？
A：熒光定量pcr儀常用的檢測模式有TaqMan探針和SYBR Green I 檢測模式。
Q：7500定量PCR儀可以使用0.2ml PCR反應(yīng)管或者96孔板嗎？
A：不可以，7500快速定量PCR儀只支持0.1ml PCR反應(yīng)管或者96孔板。
Q：熒光定量pcr儀有什么特點？
A：（1）系統(tǒng)可以提供高通量，如384孔板和低密度芯片升級，以及自動手臂來裝載反應(yīng)板設(shè)備；
（2）是一個激發(fā)光和四色濾光片
（3）系統(tǒng)是用氬離子激光作為激發(fā)光源，可以掃描500nm -650nm所有波長的熒光
（4）快速系統(tǒng)是用鹵鎢燈作為激發(fā)光源，并利用濾光片檢測激發(fā)熒光
（5快速有五個激發(fā)光和五個濾光片，所以可以檢測遠(yuǎn)紅外。
Q：內(nèi)參基因與目標(biāo)基因是否需要在相同的反應(yīng)板上運行相對定量？
A：是，內(nèi)參基因必須和目標(biāo)基因在相同的反應(yīng)板上。軟件可以根據(jù)在相同反應(yīng)板上的內(nèi)參基因和目標(biāo)基因自動進(jìn)行相對定量計算，并計算估值區(qū)間。
Q：BHQ作為探針的淬滅基團(tuán)，在ABI定量PCR系統(tǒng)如何設(shè)定？
A：淬滅基團(tuán)設(shè)為none。
Q：7HT定量PCR系統(tǒng)軟件生成的文件有哪些？
A：針對7300 v1.4及以下版本軟件，7500 v1.4 及以下版本軟件，7900HT軟件生成的文件，包含擴(kuò)增曲線的為數(shù)據(jù)文件，以 sds為文件后綴。相對定量分析產(chǎn)生以sdm為后綴文件，設(shè)置模板以 sdt為后綴。
Q：用戶是否可以添加自定義染料？
A：可以，可以添加自定義染料，但染料的激發(fā)和發(fā)射波長必須與儀器的濾光片設(shè)置兼容。
Q：如何監(jiān)控反應(yīng)體系是否有蒸發(fā)？
A：查看Rox信號是否在整個PCR過程中保持一致。在多組分圖譜界面，選擇單孔，如果Rox信號逐漸增高，代表樣品孔中有蒸發(fā)。
Q：作用原理是怎么樣的？
A：熒光定量pcr儀常用的檢測模式有TaqMan探針和SYBR Green I 檢測模式。
